猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪病毒性腹泻疫病，是严重危害养猪业的重要疫病之一，给世界各国的养猪业造成了巨大经济损失。山东惠民县某养猪场发生了以哺乳仔猪水样腹泻、并伴有呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病，现将诊治过程报告如下。
1、发病情况
发现有哺乳仔猪（3-21日龄）呕吐、腹泻、脱水。同圈仔猪发病率达%，不同圈发病仔猪死亡率在11.1%-30.0%。用抗生素治疗无效。
2、临床症状
发病哺乳仔猪普遍精神沉郁，食欲下降，水样腹泻、个别仔猪伴有呕吐，仔猪普遍偏瘦，但体温正常。
3、病理变化
剖检病死仔猪发现：小肠扩张、肠壁变薄，肠内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿。
4、病毒分离鉴定
4.1病料采集
取病死仔猪小肠黏膜、内容物及水样腹泻粪便作为分离病毒的样品，将样品冷冻保存。
4.2病料处理
将采集的样品用灭菌PBS研磨，反复冻融，在4℃条件下r/min离心30min、吸取上清，将上清液用0.22μm一次性滤器过滤除菌、分装保存于-80℃备用。
5、病毒的RT-PCR鉴定
5.1引物设计
根据GenBankJN.1序列设计，扩增长度bp，用于鉴定猪流行性腹泻病毒。引物序列如下：上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC
5.2病毒的RT-PCR
提取病料的RNA，并同时提取PEDV阴性对照（细胞培养液）及PEDV阳性细胞毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程(大连)有限公司提供的RNA提取试剂盒提取，一步法RTPCR反应成分及反应程序如下。
RT-PCR反应体系为：10×Buffer5μL，MgCl2(25mmol/L)10μL，dNTPs(10mmol/L)5μL，RnaseInhibitor(40U/μL)1μL，AMVRTaseXL(5u/μL)1μL，AMV-OptimizedTaq(5U/μL)1μL，上游引物P1（20μmol/L）1μL，下游引物P2（20μmol/L）1μL，模板5μL，RNaseFreeddH2Oupto50μL。
RT-PCR反应条件为：50℃反转录1h；94℃5min；进入PCR循环，94℃45S，55℃1min，72℃1min，35个循环后，72℃延伸10min。反应结束后，用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
5.3病毒的RT-PCR鉴定结果
琼脂糖凝胶电泳检测显示，病毒的RT-PCR扩增产物大小约bp，与预期一致（如图1所示）。回收RTPCR产物，送往上海生物工程有限公司测序。测序结果与GenBank上报道的猪流行性腹泻病毒序列同源性在96%-99%之间。
6、治疗措施
经上述诊断确认病原为猪流行性腹泻病毒。建议该养猪场采取如下措施：
6.1保温及消毒措施
建议保持猪舍温度高于正常温度1-2℃；保持猪舍卫生整洁及全面、定期消毒。
6.2补液，防止脱水措施
可以购买正规厂家的优质口服补液盐，让发病猪群普遍饮用。
6.3防止继发细菌感染
可用痢菌净防止细菌感染。
6.4高免血清疗法
对发病仔猪采用高免血清被动治疗方法。采集发病猪群中痊愈后老母猪血液，制备高免血清：分离血清（注意无菌操作），在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔猪体重，肌肉注射高免血清（建议0.5mL/kg，1次/d，连用2次）。
6.5疫苗接种
建议对全场猪群紧急免疫猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗。高免血清治愈的发病仔猪猪群1周后进行疫苗接种。
该养猪场按照上述治疗措施进行了操作，发病猪群死亡率及发病率大幅降低。实施2周后病情基本缓解，猪场进入稳定状态。
7、小结
自年以来，猪腹泻病成为严重危害养猪行业的重大传染病，给养猪业造成巨大经济损失。专家证实猪流行性腹泻病毒是猪腹泻病的主要病原之一。笔者在收到山东惠民某猪场暴发疑似猪流行性腹泻病的疫情后，通过发病情况调查、临床观察及病理剖检，初步判断疫情为猪流行性腹泻引起。收集病料进行病毒分离及RTPCR鉴定，证实病原为猪流行性腹泻病毒。并按照猪流行性腹泻疫情采取防治措施，经过保温、消毒、补液、防继发感染及紧急免疫接种，疫情得到有效控制。（资料来源：张文通等，猪业科学(8)P80-81）
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